Fluoriscenza microscopy: principii di u mètudu

Absorption e sunari-emissioni di più secrete nurgànici è biulogica lume hè u risultatu di phosphorescence o virdi. A sfarenza trà u fenomenu hè a durata di u tretu trà absorption e missioni di pèrdita di luce. Quandu lu virdi di sti prucessi accade quasi simultaneously, mentri phosphorescence - cun qualchi pusà.

infurmazioni storichi

In su 1852, scinziatu ngrisi Stokes, prima discritta virdi. Si purtaru cu iddi un nova parolla cum'è un risultatu di i sperimenti cun fluorspar, chì etnìi russu sottu di luce ul ultraviolet. Stokes divirsamenti un finominu ntirissanti. Hè trovu chì l 'onda di u raghji fluoriscenti hè sempre più cà l' apporti di l 'di luce iccitazzioni cchiù.

À cunfirmà u ipotisi in lu 19u seculu, ci sò stati tanti spirimenti. Si mustrò chì una varietà di analise fluoresce sutta la nfluenza di lume ul ultraviolet. À mezu à i tessuti, frà altre cose, è stata, cristalli, resins, minirali, chlorophyll, droga capricci, a chiddi nurgànici, vitamini, olii. L'usu direttu di invintati di i testi biodiversità accuminzau solu in lu 1930,

Fluoriscenza microscopy: Description

Certi di i matiriali usatu in a prima mità di u studii 20u seculu esposi altu ribomba. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Grazie à u spettaculu, chì ùn pudia esse truvatu da i metudi di cuntrastu, lu mètudu di microscopy fluoriscenza hè divintatu un arnese di primura in a ricerca G. e biodiversità. Smetti i risultati mpurtanti foru acquistatu, è di materia.

? Cosa vantaghji faci lu mètudu di microscopy fluoriscenza? Cù novi materiali ogettu pussibuli è u selezzione di cumpunenti submicroscopic portable assai specifichi. Fluoriscenza microscopy pò detect mulèculi sola. A variità di invintati permette l 'identificazione di parechje voci sùbitu. Nunustanti lu buscu francese spatial limitata di u limitu lueur di u vagliatura, chi, a turnu, dipende di a pruprietà specifichi di u campionu, l 'identificazione di mulèculi sottu à stu livellu è puru abbastanti pussibili. Various analise dopu irradiation prisièntanu autofluorescence. Stu fenominu si anchiamènti usatu in petrology, libru, l 'industria semiconductor.

Features

Corso di lingua Francese tessuti, animale o pathogens spessu cumplessa o troppu debuli, o assai forti autofluorescence unspecific. Perciò, u valore in studii àvi iniziu in i cumpunenti di a materia impauriti a na lunchizza specifichi è Light u temperature purtata di luce nicissariu. Fluorochromes cumportu comu invintati capaci di indipindente particularmente di strutturi (vede, o di primura). Cusì si hannu un altu selectivity à u testu, è u cassia quantistica.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluoriscenza microscopy has been anchiamènti usatu nzinu l 'avventu di invintati naturali è di sintesi. Pussidiani sicura au temperature di i missioni è granni e urigine di obiettivi biodiversità specifichi.

Identificazione di individuale mulèculi

À spessu, in cundizioni idiali, vi ponu fassi una rossa elementu siparati. Per quessa, à mezu à altre cose, ci vole à purtà un un abbastanza bassu bottu di u merulinus è i fondo òttica. mulècula Fluorescéine a fallimentu duvuta a PUPULERONS pò emettini sin'à 300 mila. futòni. At efficienza cullezzione u 20% di u prucessu di e li pò iscrive in una quantità di circa 60 mila.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluoriscenza microscopy basatu nantu photodiodes francese avalanche o municipal ilittronica, u dirittu i circadori di fighjulatu u cumpurtamentu di individuale urgànichi attraversu lu secunnu, è in certi casi ancu di minuti.

cumplessità

A questione chjave in favore di u supprissioni di fondo, c'eranu òttica. Duvuta a lu fattu chì parechji di i materiali usati in lu disignu di stacci e lens vede qualchi autofluorescence, i sforzi di scentifichi in i primi fasi stati orientatu a la pruduzzioni di cumpunenti avè un bassu virdi. Però, chì seguitanu spirimenti hannu purtatu a nova cuegghiè. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. In particulare, si fù trovu chì fluoriscenza microscopy, basatu nantu riflessione interna tutali, si permette di ghjunghje ne à un fondo, bassu è altu temperature lume iccitazzioni cchiù.

miccanisimu

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Li sò princìpî di microscopy virdi, basatu nantu riflessione interna tutali hè l 'usu di onda évanescent o évanescent. Si faci in u confinu tra mista cun differente indices refractive. In stu casu, la luci, passa à traversu l 'abbé. Si hà un paràmetru altu Index refractive.

L'abbé sa crèsia a suluzione vapor o di vitru cu suttana paràmetru. Sè un raggiu di luci sê si à un angle, chi hè di più critichi, lu Fasciu hè tutalmente reflété da l 'interfaccia. Stu fenomenu, a turnu, nascenu onde nonpropagating. In autri paroli, u campu erani caricate chì entri in un medie cù un paràmetru bassa Index refractive à una distanza di menu di 200 nanometers.

L'onda évanescent temperature di u lume saria bastatu à passiuneghjani fluorophores. Tuttavia, per via di u so assai picculu tremenda, u so vulume sarà assai nica. U risultatu hè un fondo, bassu-livellu.

mudificazione

microscopy fluoriscenza hè basatu nantu riflessione interna tutali, si pò realizatu cù Pizz-temperature. Stu abbisogna lens cù alta focal numericu (almenu 1.4, ma hè preziosi ca nun arrivava 1.45-1.6), e parti Illuminert lignu campu. A quessu hè truvatu cù una taglia picculu picu. Per più uniformità cù un anellu magre, chì hè pruibitu da una parte di u bracciu. Di l 'angle, critica, dopu à chì ci hè una riflessione tutali, avemu bisognu di un altu livellu di anglé di u medie immersione in u lente e lu biccheri Cover di u Microscope.